一、培養(yǎng)基明細(xì):
名稱 規(guī)格
堿性蛋白胨水(APW) 250g
TCBS瓊脂 250g
三糖鐵瓊脂(TSI) 250g
雙糖鐵瓊脂(KIA) 250g
T1N1瓊脂 250g
精氨酸葡萄糖斜面瓊脂(AGS) 100g
Hugh-Leifson葡萄糖肉湯(HLGB) *
MR-VP肉湯 20支
ONPG胨水 20支
Andrade氏糖類肉湯 250g
Andrade氏指示劑 100ml
氧化酶試劑 1g
粘絲試驗溶液 *
革蘭氏染色液 5ml*8
5%紅細(xì)胞生理鹽水 *
50萬單位多黏菌素B紙片 *
10ug和150ugO/129紙片 *
霍亂弧菌診斷血清(O1群) 1ml*12
霍亂弧菌診斷血清(O139群) 1ml
二、備注:
1、依據(jù)SN/T 1022—2001出口食品中霍亂弧菌檢驗方法 適用于出口水產(chǎn)品及其它食品的檢驗。
2、術(shù)語:
霍亂弧菌:為革蘭氏陰性菌,菌體彎曲呈弧狀或逗點狀,菌體一端有單根鞭毛和菌毛,無莢膜與芽胞。經(jīng)人工培養(yǎng)后,易失去弧形而呈桿狀。細(xì)菌運動極為活潑,呈流星穿梭運動。營養(yǎng)要求不高,在PH8.8~9.0的堿性蛋白胨水或平板中生長良好。因其他細(xì)菌在這一PH不易生長,故堿性蛋白胨水可作為選擇性增殖霍亂弧菌的培養(yǎng)基。在堿性平板上菌落直徑為2mm,圓形,光滑,透明。
霍亂弧菌能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽,靛基質(zhì)反應(yīng)陽性,當(dāng)培養(yǎng)在含硝酸鹽及色氨酸的培養(yǎng)基中,產(chǎn)生靛基質(zhì)與亞硝酸鹽,在濃硫酸存在時,生成紅色,稱為霍亂紅反應(yīng),但其他非致病性弧菌亦有此反應(yīng),故不能憑此鑒定霍亂弧菌。EL Tor型霍亂弧菌與古典型霍亂弧菌生化反應(yīng)有所不同。前者Vp陽性而后者為陰性。前者能產(chǎn)生強烈的溶血素,溶解羊紅細(xì)胞,在血平板上生長的菌落周圍出現(xiàn)明顯的透明溶血環(huán),古典型霍亂弧菌則不溶解羊紅細(xì)胞。個別EL Tor型霍亂弧菌株亦不溶血。根據(jù)弧菌O抗原不同,分成個血清群,第群包括霍亂弧菌的兩個生物型。第群A、B、C三種抗原成份可將霍亂弧菌分為三個血清型:含AC者為原型(又稱稻葉型),含AB者為異型(又稱小川型),A、B、C均有者稱中間型(彥島型)?;魜y弧菌對熱,干燥,日光,化學(xué)消毒劑和酸均很敏感,耐低溫,耐堿。濕熱55,15分鐘,100,1~2分鐘,水中加0.5ppm氯15分鐘可被殺死。0.1%高錳酸鉀浸泡蔬菜、水果可達(dá)到消毒目的。在正常胃酸中僅生存4分鐘。
3、粘絲試驗溶液:溶解0.5g去氧膽酸鈉于100ml水中,擰緊瓶蓋保存于冰箱中,無需高壓滅菌?;魜y弧菌在鈣溶液中被乳化后,1min內(nèi)形成粘液狀團(tuán)塊。當(dāng)粘塊從玻片上被拉出2cm—3cm時呈粘絲。
4、Hugh-Leifson葡萄糖肉湯(HLGB):
配方:
蛋白胨 2.0g
酵母浸粉 0.5g
氯化鈉 30.0g
葡萄糖 10.0g
溴甲酚紫 0.015g
瓊脂 3.0g
蒸餾水 1000ml
制法:將各成分(溴甲酚紫除外)加入蒸餾水中,充分混勻,攪拌加熱溶解調(diào)節(jié)pH7.4,加入溴甲酚紫,混勻,分裝于15mm*150mm試管的1/3容量,121高壓滅菌15min。接種后覆蓋約1ml滅菌礦物油以檢查葡萄糖發(fā)酵。