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大腸菌群的測定方法!

一、大腸菌群的定義
大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。大腸菌群不是細(xì)菌學(xué)上的分類命名,而是根據(jù)衛(wèi)生學(xué)方面的要求,提出的與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌,即作為食品、水體等是否受過人畜糞便污染的指示菌,這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致。根據(jù)進一步的生化試驗,可將這群細(xì)菌再分為大腸艾希氏菌(俗稱大腸桿菌)、弗氏檸檬酸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和陰溝腸桿菌等。  
二、大腸菌群測定——MPN法檢驗幾點說明 
MPN檢索表: 
MPN 為最大可能數(shù)(Most Probable Number)的簡稱。這種方法,對樣品進行連續(xù)系列稀釋,加入培養(yǎng)基進行培養(yǎng),從規(guī)定的反應(yīng)呈陽性管數(shù)的出現(xiàn)率,用概率論來推算樣品中菌數(shù)最近似的數(shù)值。MPN檢索表只給了三個稀釋度,如改用不同的稀釋度,則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低或增加10倍。 
初發(fā)酵和證實試驗:
1、兩步法進行了兩次乳糖發(fā)酵試驗。初發(fā)酵和證實實驗所用培養(yǎng)基不同,但都是為了證實培養(yǎng)物是否符合大腸菌群的定義,即“在37分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣”。 LST中提供了磷酸鹽緩沖體系,氯化鈉可維持滲透壓,月桂基硫酸鈉可抑制非大腸菌群的生長,這個緩沖蛋白胨乳糖肉湯允許“緩慢乳糖發(fā)酵(Slow lactose fermentations)”來促進菌體產(chǎn)氣。BGLB中膽鹽和煌綠可以抑制革蘭氏陽性細(xì)菌和除了大腸菌群的很多革蘭氏陰性細(xì)菌。
2、初發(fā)酵陽性管,不能肯定就是大腸菌群細(xì)菌,經(jīng)過證實試驗后,有時可能成為陰性。有數(shù)據(jù)表明,食品中大腸菌群檢驗步驟的符合率,初發(fā)酵與證實試驗相差較大。因此,在實際檢測工作中,證實試驗是必需的。
產(chǎn)氣量與倒管:
在乳糖發(fā)酵試驗工作中,經(jīng)常可以看到在發(fā)酵倒管內(nèi)極微少的氣泡(有時比小米粒還?。?,有時可以遇到在初發(fā)酵時產(chǎn)酸或沿管壁有緩緩上浮的小氣泡。實驗表明,大腸菌群的產(chǎn)氣量,多者可以使發(fā)酵倒管全部充滿氣體,少者可以產(chǎn)生比小米粒還小的氣泡。如果對產(chǎn)酸但未產(chǎn)氣的乳糖發(fā)酵如有疑問時,可以用手輕輕打動試管,如有氣泡沿管壁上浮,即應(yīng)考慮可能有氣體產(chǎn)生,而應(yīng)作進一步試驗。