細(xì)胞懸液制備后，需要計(jì)算懸液中所含細(xì)胞數(shù)量；一般以細(xì)胞數(shù)/mL 表示。因只有健康的細(xì)胞才有活力，接種后能夠生長增殖，所以在接種關(guān)應(yīng)先檢查一下細(xì)胞的活力。
（1） 計(jì)數(shù)板
用 96% 酒精沖洗計(jì)數(shù)板后，用干凈鹿皮擦凈，另擦凈蓋片一張；把蓋片覆在計(jì)數(shù)板上面，使之微微移向一側(cè)，露出計(jì)數(shù)板臺(tái)面少許，以便滴加細(xì)胞懸液。
（2） 染色
取吸管 1 支，伸入培養(yǎng)瓶中，輕輕反復(fù)吹打細(xì)胞懸液使細(xì)胞重懸均勻后，立即吸細(xì)胞懸液少許，向另一離心管中滴入細(xì)胞懸液 9 滴，再滴入臺(tái)盼藍(lán)染液 1 滴，混勻，置 2~3 分鐘。
（3） 加懸液
把計(jì)數(shù)板平放在顯微鏡臺(tái)上，立即從計(jì)數(shù)板邊緣輕輕滴 1~2 滴已染色的細(xì)胞懸液，使之充滿計(jì)數(shù)板和蓋片間空隙中。
（4） 鏡檢
鏡下觀察可見細(xì)胞分散各處，健康細(xì)胞胞體完整，透明不著色，凡著色細(xì)胞均為不健康者。計(jì)算四角大方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)；壓中線者只計(jì)算左線和上線者，右線和下線不計(jì)算在內(nèi)（即僅計(jì)算壓兩個(gè)邊的細(xì)胞）。
（5） 接種
培養(yǎng)通過計(jì)數(shù)測知懸液中細(xì)胞數(shù)后，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需細(xì)胞數(shù)量向培養(yǎng)容器中接種。細(xì)胞接種數(shù)量隨實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒀搴亢图?xì)胞生物性狀而定；一般接種量在 1~10 × 105 細(xì)胞/mL 范圍，實(shí)驗(yàn)周期短，希望細(xì)胞增殖較快時(shí)，接種量可大些。用含血清量大的培養(yǎng)液培養(yǎng)胚胎來源細(xì)胞、無限細(xì)胞系和惡性細(xì)胞系時(shí)，細(xì)胞接種數(shù)量不宜太大。
（1） 向計(jì)算板中滴細(xì)胞懸液時(shí)要干凈利落，勿令液面蓋過蓋片，加量要適當(dāng)，過多易使蓋片漂移，過少易出現(xiàn)氣泡，不理想時(shí)應(yīng)重做。
（2） 鏡下計(jì)數(shù)時(shí)，偶見有由兩個(gè)以上組成的細(xì)胞團(tuán)，應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞數(shù)計(jì)算，如細(xì)胞團(tuán)數(shù)占 10% 以上，說明消化不充分；功細(xì)胞數(shù)少于 200 個(gè) / 10 mm2 或多于 500 個(gè) / 10 mm2 時(shí)，均說明稀釋不當(dāng)，需重新制備細(xì)胞懸液，再重計(jì)數(shù)。
（3） 經(jīng)常使用同一細(xì)胞在相同條件下工作時(shí)，對各種情況已做到心中有數(shù)情況下，可略去某些環(huán)節(jié)，如染色檢查等；計(jì)算板計(jì)算細(xì)胞數(shù)法有一定誤差，用作測定細(xì)胞生長曲線時(shí)，每一樣品應(yīng)重復(fù)計(jì)算 4 次，取均值，較為可靠，若有電子細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器當(dāng)然更好。
（4） 體外培養(yǎng)細(xì)胞在懸液中呈圓形，平均直徑 8~10 μm，當(dāng)被接種到底物上生長時(shí)，經(jīng)過延展后，則呈扁形，在底物上所占的面積按直徑算可達(dá) 20~25 μm，則 1 cm2 的底物上可容納 4~5 萬個(gè)這樣的細(xì)胞，這是理論上的數(shù)值，但在實(shí)際應(yīng)用中，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到 80 % 匯合狀態(tài)時(shí)便應(yīng)做傳代處理，因此細(xì)胞數(shù)量比上述理論數(shù)量少。
