將一定數(shù)量的細(xì)菌，接種于適宜的液體培養(yǎng)基中，在適溫下培養(yǎng)，定時(shí)取樣測(cè)數(shù)，以菌數(shù)的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，生長(zhǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，作出的曲線稱(chēng)為生長(zhǎng)曲線。該曲線表明細(xì)菌在一定的環(huán)境條件下群體生長(zhǎng)與繁殖的規(guī)律。一般分為延緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期及衰亡期四個(gè)時(shí)期，各時(shí)期的長(zhǎng)短同菌種本身特征、培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件不同而異。
比濁法是根據(jù)細(xì)菌懸液細(xì)胞數(shù)與混濁度成正比，與透光度成反比關(guān)系，利用光電比色計(jì)測(cè)定細(xì)胞懸液的光密度(即OD值)，用于表示該菌在本實(shí)驗(yàn)條件下的相對(duì)生長(zhǎng)量。
實(shí)驗(yàn)設(shè)正常生長(zhǎng)、加酸抑制和加富培養(yǎng)等三種處理，以了解細(xì)菌在不同生長(zhǎng)條件下的生長(zhǎng)情況。
一、實(shí)驗(yàn)器材
1. 活材料：大腸桿菌(E.coli)。
2. 培養(yǎng)基和試劑：牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基14支(每支10 mL)，濃縮5 倍的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1支。無(wú)菌酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。
3. 器材：1 mL無(wú)菌吸管、搖床、冰箱、光電比色計(jì)、標(biāo)簽等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 接種
取13支裝有牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的試管，貼上標(biāo)簽(注明菌名、培養(yǎng)處理、培養(yǎng)時(shí)間、組號(hào))。按無(wú)菌操作法用吸管向每管準(zhǔn)確加入0.2 mL的大腸桿菌培養(yǎng)液，接種后，輕輕搖蕩，使菌體混勻。另一支不接種的培養(yǎng)管注明CK(對(duì)照)。
2. 培養(yǎng)
將接種后的培養(yǎng)管置于搖床上，在37℃下振蕩培養(yǎng)。其中9支培養(yǎng)管分別于培養(yǎng)的0、1．5、3、4、6、8、10、12和14 h后取山，放冰箱中貯存，待測(cè)定。加酸處理。取出經(jīng)4h培養(yǎng)的另二支培養(yǎng)管，按無(wú)菌操作法加入1 mL無(wú)菌酸溶液，搖勻后放回?fù)u床上，繼續(xù)振蕩培養(yǎng)，于培養(yǎng)8 h和14 h后取出放冰箱中貯存，待測(cè)定。加富營(yíng)養(yǎng)物處理。余下的二支培養(yǎng)管于培養(yǎng)6h后取出，按無(wú)菌操作法加入濃縮5倍的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液1 mL，搖勻后，繼續(xù)進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，于培養(yǎng)8 h和14 h后取出，放入冰箱中貯存，待測(cè)定。
3. 比濁
將培養(yǎng)不同時(shí)間、形成不同細(xì)胞濃度的細(xì)菌培養(yǎng)液進(jìn)行適當(dāng)稀釋?zhuān)构饷芏戎翟?.0-0.4范圍內(nèi)，以未接種的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基調(diào)零點(diǎn)，在光電比色計(jì)上，選用400-440nm波長(zhǎng)的濾光片進(jìn)行比濁，從最稀濃度的菌懸液開(kāi)始，依次測(cè)定。
4. 可選步驟
將大腸桿菌接入裝有牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的小試管中(試管要能插入放比色杯的比色槽內(nèi))。37℃下振蕩培養(yǎng)，分別在0、1.5 、3、4、6、8、10、12和14 h取出，以未接種培養(yǎng)液調(diào)零點(diǎn)，在光電比色計(jì)上比色。比色時(shí)應(yīng)自制一個(gè)暗盒將培養(yǎng)管和比色槽罩住，以形成一個(gè)暗室。
三、繪制曲線
以細(xì)菌懸液的光密度值(OD)為縱坐標(biāo)，培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，給出大腸桿菌在正常生長(zhǎng)、加酸處理和加富培養(yǎng)三種條件下的生長(zhǎng)曲線。
如果我們將上述培養(yǎng)0，1.5，3，4，6，8，10，12，14h的細(xì)菌懸液用稀釋平板測(cè)數(shù)法進(jìn)行測(cè)數(shù)，測(cè)出不同時(shí)間的含菌數(shù)，以菌懸液比濁的光密度值為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌的數(shù)量為縱坐標(biāo)，繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線，這樣在測(cè)得了任一培養(yǎng)時(shí)間的菌懸液光密度值后，就可以在此標(biāo)淮曲線上查出含菌數(shù)。這種方法已在工業(yè)上廣泛采用，它可以節(jié)省許多稀釋平板測(cè)數(shù)的時(shí)間， 直接用比濁法測(cè)得的光密度值查標(biāo)準(zhǔn)曲線以了解各個(gè)培養(yǎng)時(shí)期的菌數(shù)消長(zhǎng)情況。
如果我們將上述培養(yǎng)0，1.5，3，4，6，8，10，12，14h的細(xì)菌懸液用稀釋平板測(cè)數(shù)法進(jìn)行測(cè)數(shù)，測(cè)出不同時(shí)間的含菌數(shù)，以菌懸液比濁的光密度值為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌的數(shù)量為縱坐標(biāo)，繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線，這樣在測(cè)得了任一培養(yǎng)時(shí)間的菌懸液光密度值后，就可以在此標(biāo)淮曲線上查出含菌數(shù)。這種方法已在工業(yè)上廣泛采用，它可以節(jié)省許多稀釋平板測(cè)數(shù)的時(shí)間， 直接用比濁法測(cè)得的光密度值查標(biāo)準(zhǔn)曲線以了解各個(gè)培養(yǎng)時(shí)期的菌數(shù)消長(zhǎng)情況。
