明舟生物KGN介紹

一．產(chǎn)品簡介

1、細(xì)胞名稱：人卵巢顆粒細(xì)胞；KGN

 2、生長特性：    R 貼壁   □ 懸浮   □懸浮+貼壁

3、細(xì)胞生長條件：

培養(yǎng)條件         DMEM/F-12+10%FBS+1%雙抗

溫度           37℃

空氣條件       5% CO2,95% AIR

傳代方法生長緩慢建議1:2傳代，2~3天換液

凍存條件90%FBS+10%DMSO

4、背景資料：該細(xì)胞株是顆粒細(xì)胞瘤。細(xì)胞在加入人體絨膜促性腺激素后可能產(chǎn)生孕酮。細(xì)胞生長緩慢。

4、圖片：

二．使用方法

1、您收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作

取出25cm²培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

2、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm²培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml完全培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細(xì)胞完全貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm²培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種25cm²培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。