二.使用方法
1、您收到細胞后,請按照以下方法進行操作:
取出細胞培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài),然后離心換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。
2、細胞傳代:
待細胞達到一定密度(不超過1x10^6/ml)可按照以下方法換液培養(yǎng)或傳代。
方法①:收集細胞,1000rpm離心5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法②:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
貼壁細胞需要用胰酶進行消化。
3、細胞凍存:
1)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
2)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細胞,并放置于凍存管中;
3)先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細胞復(fù)蘇: 1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁; 2)將凍存管中的細胞移至含10ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸,接種25cm2培養(yǎng)瓶,于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)第二天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
注:培養(yǎng)瓶內(nèi)非完全培養(yǎng)基,請務(wù)必使用準備好的新鮮培養(yǎng)基。懸浮細胞運輸中會有少些細胞因為碰撞裂解產(chǎn)生碎片,收到細胞如碎片較多時,胎牛血清可以用15%培養(yǎng)三天,利于細胞盡快恢復(fù)狀態(tài),細胞穩(wěn)定后再調(diào)回10%即可。