細胞介紹:
人非小細胞肺癌細胞(A549)由D.J.Griad 通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系,患者為58 歲白人男性。人非小細胞肺癌細胞(A549)能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。
細胞特性:
1) 來源:肺癌
2) 形態(tài):上皮細胞樣,貼壁生長
3) 含量:>1x106 個/mL
4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規(guī)格:T25 瓶或者1mL 凍存管包裝
人非小細胞肺癌細胞(A549)接受后的處理:
1)收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。
2)請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25 瓶置于37℃培養(yǎng)約
3)棄去T25 瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml 本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
4)如果細胞長滿(90%以上)請及時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml 本公司附
5)接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我
人非小細胞肺癌細胞(A549)用途:僅供科研使用。
明舟生物培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考
一.人非小細胞肺癌細胞(A549)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備F-12K 培養(yǎng)基(F-12K,GIBCO,貨號21127-022),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.人非小細胞肺癌細胞(A549)細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL 細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細胞1-2 次。
2. 加2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培
3. 輕輕吹打后吸出,移入15ml 離心管中,在1000RPM 條件下離心4 分鐘,
4. 移入到事先準備好的含有5ml 培養(yǎng)基的T-25 培養(yǎng)瓶中或含有14ml 培養(yǎng)
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,先
注意事項:
1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,
注意事項:
1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,