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人肺腺癌細胞(NCI-H441)

人肺腺癌細胞(NCI-H441介紹:

人肺腺癌細胞(NCI-H4411982年取自一位男性肺乳頭狀腺癌患者的心包夜,該細胞系表達主要表面活性劑的脫輔基蛋白(SP-A)的mRNA和蛋白質(zhì)。電子顯微鏡顯示細胞多層薄片狀和細胞質(zhì)結(jié)構(gòu)類似無纖毛分泌細胞顆粒。細胞可以在含或不含血清軟瓊脂克隆。

人肺腺癌細胞(NCI-H441特性:

1 來源:人肺

2 形態(tài):上皮細胞樣,貼璧生長

3 含量:>1x106 /mL

4 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5 規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

人肺腺癌細胞(NCI-H441運輸和保存:

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式

1)干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;

2)存活細胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

3)收到細胞后請拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途:僅供科研使用。

細胞接收后的處理:

1) 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2) 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,最好在低倍鏡(45X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B(tài)請在10X20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4) 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。

5) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。

6備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議12傳代 。     

人肺腺癌細胞(NCI-H441培養(yǎng)步驟

一.人肺腺癌細胞(NCI-H441培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1 準備RPMI-1640 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%

2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二.細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL 細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL 培養(yǎng)基的15ml 離心管中混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘,棄去上清液,加入1mL 養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細胞1-2 次。

2. 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml 此細胞的培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕吹打后吸出,移入15ml 離心管中,在1000RPM 條件下離心4 分鐘,棄去上清液,加入1mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 移入到事先準備好的含有5ml 培養(yǎng)基的T-25 培養(yǎng)瓶中或含有14ml 培養(yǎng)基的T-75 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,先要消化處理并進行細胞計數(shù)。消化方法按照細胞傳代方法的1-3 步驟進行,最后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數(shù)后離心,用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO 后迅速混勻,按每1ml 的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106 個細胞凍存。

注意事項:

1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。