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人胃癌細(xì)胞(NCI-N87)

人胃癌細(xì)胞(NCI-N87)介紹:

人胃癌細(xì)胞(NCI-N87)表達(dá)表面糖蛋白癌胚抗原(CEA)TAG 72, 并且沒(méi)有左旋多巴胺脫羧(DDC)活性。它們的血管活性的腸肽(VIP)受體活性極低并缺乏胃泌激素受體。它們表達(dá)蕈毒堿膽堿受體。沒(méi)有證據(jù)表明存在N-myc, L-myc, myb EGF 受體基因的重組。人胃癌細(xì)胞(NCI-N87)表達(dá)的c-myc c-erb-B 2 RNA 水平與其它細(xì)胞株相當(dāng)。以下基因不表達(dá): N-myc, L-myc, c-cis, IGF-2, 或胃泌激素釋放肽。據(jù)報(bào)道人胃癌細(xì)胞(NCI-N87)植板率為4.3%。

人胃癌細(xì)胞(NCI-N87)特性

1) 來(lái)源:胃癌,肝轉(zhuǎn)移

2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣

3) 含量:>1x106 個(gè)/mL

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5) 規(guī)格:T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運(yùn)輸和保存:使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml 凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min 后,于潔凈操作臺(tái)棄去上清,加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm 培養(yǎng)皿或者T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

細(xì)胞用途:僅供科研使用。

人胃癌細(xì)胞(NCI-N87)培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37 攝氏度。

3)凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二.細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ)1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?span lang="EN-US">細(xì)胞懸液加入10cm 皿中,加入約8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞1-2 次。

2. 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM 條件下離心4 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 細(xì)胞懸液按12 15 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml 含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO 后進(jìn)行凍存。

注意事項(xiàng):

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。