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人腎癌細(xì)胞(A-704)

人腎癌細(xì)胞(A-704)介紹

人腎癌細(xì)胞(A-704)來源于78 歲男性腎癌患者,D.J. Giard 建系,人腎癌細(xì)胞(A-704)適宜做轉(zhuǎn)染宿主。人腎癌細(xì)胞(A-704)在免疫缺陷小鼠上不能形成移植瘤,但是可以在半固體培養(yǎng)基中形成克隆。

人腎癌細(xì)胞(A-704)特性:

1) 來源:腎癌

2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長

3) 含量:>1x106 /mL

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運輸和保存:使用T25 瓶充液發(fā)送活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,請先在顯微鏡下檢查細(xì)胞生長狀態(tài),并將T25 瓶置于培養(yǎng)箱約6h 或過夜后,再次檢查細(xì)胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好,可進行細(xì)胞后續(xù)處理操作,按照以下方式進行。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物,請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

人腎癌細(xì)胞(A-704)用途:僅供科研使用。

人腎癌細(xì)胞(A-704)培養(yǎng)步驟

一.人腎癌細(xì)胞(A-704)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1)準(zhǔn)備MEM 培養(yǎng)基(MEM, GIBCO,貨號41500034,添加NaHCO3 1.5g/L,丙酮酸鈉0.11g/L)。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37 攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二.細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘,棄去上清液,補1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)?span lang="EN-US">細(xì)胞懸液加入10cm 皿中,加入約8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢細(xì)胞密度。

2細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細(xì)胞1-2 次。

2. 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM 條件下離心4 鐘,棄去上清液,補加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 細(xì)胞懸液按12 15 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml 含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO 后進行凍存。

注意事項:

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。