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小鼠正常肝細(xì)胞(NCTC 1469)

小鼠正常肝細(xì)胞(NCTC 1469)介紹:1952 年建系,源于正常C3H/An 小鼠的肝臟組織,表達(dá)H-2K 抗原,鼠痘病毒陰性。

小鼠正常肝細(xì)胞(NCTC 1469)特性:

1) 來源:小鼠的肝組織

2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣

3) 含量:>1x106 個(gè)/mL

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5) 規(guī)格:T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

細(xì)胞接受后的處理:

1)收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。

2)請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),去掉封口膜并將T25 瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3)棄去T25 瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml 明舟生物(mingzhoubio附帶的完全培養(yǎng)基。

4)如果細(xì)胞長(zhǎng)滿(90%以上)請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml 明舟生物(mingzhoubio)附帶的完全培養(yǎng)基。

5)接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

小鼠正常肝細(xì)胞(NCTC 1469)用途:僅供科研使用。

明舟生物(mingzhoubio)的小鼠正常肝細(xì)胞(NCTC 1469)培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1)準(zhǔn)備DMEM 培養(yǎng)基(DMEM,GIBCO,貨號(hào)11995-065);馬血清,10%;雙抗1%。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度70%-80%

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二.細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL 培養(yǎng)基的15ml 離心管中混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘,棄去上清液,加入1mL 養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞1-2 次。

2. 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml 細(xì)胞培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕吹打后吸出,移入15ml 離心管中,在1000RPM 條件下離心4 分鐘,棄去上清液,加入1mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml 培養(yǎng)基的T-25 培養(yǎng)瓶中或含有14ml 培養(yǎng)基的T-75 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

3細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25 瓶為例;

1細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗瓶底1-2 次后加入1ml 胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml 完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

21000RPM 離心5 分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO 至最終濃度為10%。加入DMSO 后迅速混勻,按每1ml 的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。明舟生物(mingzhoubio)按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106 個(gè)細(xì)胞凍存。

3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,至少2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項(xiàng):

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。