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小鼠精原細(xì)胞系(GC-1 spg)

小鼠精原細(xì)胞系(GC-1 spg介紹:小鼠精原細(xì)胞系(GC-1 spgB型精原細(xì)胞通過轉(zhuǎn)染pSV3-neo(含有SV40T抗原和新霉素耐藥編碼序列的質(zhì)粒)而產(chǎn)生的永生化,細(xì)胞表達(dá)兩種睪丸特異性異蛋白,細(xì)胞色素c和乳酸脫氫酶C4

小鼠精原細(xì)胞系(GC-1 spg特性

1)來源:睪丸

2)形態(tài):神經(jīng)元

3 含量:>1x106 /mL

4 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;

2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

 3)收到細(xì)胞后請拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。

小鼠精原細(xì)胞系(GC-1 spg用途:僅供科研使用。

細(xì)胞接收后的處理

1 收到細(xì)胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。

2 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h

3 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml新的完全培養(yǎng)基。

4 如果細(xì)胞長滿(90%以上)請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代。

5  接到細(xì)胞次日,請檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

小鼠精原細(xì)胞系(GC-1 spg培養(yǎng)步驟:

一.小鼠精原細(xì)胞系(GC-1 spg培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1 準(zhǔn)備DMEM(GIBCO,貨號12800017,添加NaHCO3 1.5g/L),培養(yǎng)基;北美胎牛血清,10%;雙抗,1%;

2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細(xì)胞處理:

1 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1215的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25瓶為例;

1細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

21000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。明舟生物(mingzhoubio按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。

3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

培養(yǎng)細(xì)胞時請注意
(1)
傳代時
細(xì)胞的接種密度應(yīng)控制在 1-4萬 活細(xì)胞/平方厘米。
(2)
選用高質(zhì)量的胎牛血清配制培養(yǎng)液。