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人胰腺導管細胞(hTERT-HPNE)

人胰腺導管細胞hTERT-HPNE描述:人胰腺導管細胞hTERT-HPNE是通過逆轉錄病毒表達載體(逆轉錄病毒表達載體pBABEpuro)轉導人胰管產(chǎn)生的,該載體含有hTERT基因。受感染的細胞端粒酶呈陽性,但未衰老,在Ref的文獻中傳代150多次后仍在增殖。

人胰腺導管細胞hTERT-HPNE特性:

1 來源:人胰腺

2 形態(tài):上皮樣 

3 含量:>1x106 /mL

4 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式

1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;

2)存活細胞,收到后應繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

3)收到細胞后請拍照,3天內如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。

人胰腺導管細胞hTERT-HPNE用途:僅供科研使用。

細胞接收后的處理:

1 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,最好在低倍鏡(45X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3 觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h

4 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。

5 懸浮細胞T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。

6備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議12傳代 。

人胰腺導管細胞hTERT-HPNE培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1 準備無糖75%DMEM(Sigma Cat#. D-5030 with additional 2 mM L-glutamine and 1.5 g/L sodium bicarbonate)),25%Medium M3 Base (Incell Corp. Cat# M300F- 500)優(yōu)質胎牛血清,5%。10 ng/ml   human recombinant EGF5.5 mM D-glucose (1g/L)  750 ng/ml puromycin

2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細胞處理:

1 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至6ml

2 細胞傳代:如果細胞密度達80%,即可進行傳代培養(yǎng)。

注:第一次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

3細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。

下面T25瓶為類;

1,細胞凍存時,取上清,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2,4min ,1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%細胞密度1-2xE6/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。

3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。