NK-92（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）基本信息：
NK-92是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株白細胞介素-2依賴型NK細胞株。NK-92MI是轉(zhuǎn)染得到的源自NK-92的IL-2非依賴的NK細胞株，親本細胞通過微粒體基因轉(zhuǎn)化法用逆轉(zhuǎn)錄病毒MFG-hIL-2載體攜帶的人IL-2cDNA進行轉(zhuǎn)化?？赡苡捎谳d體整合到基因組DNA中，轉(zhuǎn)化是穩(wěn)定的。這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562和Daudi細胞。 NK-92（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）有以下特征：CD2,CD7,CD11a,CD28,CD45,CD54表面標記陽性，
1）來源：50 years
2）形態(tài)：淋巴母細胞
3）含量：>1x106 個/mL
4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式
（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復蘇；
（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
（3）收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。
NK-92（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞））用途：僅供科研使用。
細胞接收后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3） 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。
4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。
5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。
6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代 。
NK-92（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）培養(yǎng)步驟
一．NK-92（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）MEMα+0.2mM Inositol+0.1mM β-mercaptoethanol+0.02mM Folic Acid+100-200U/ml recombinant IL-2+12.5% HS+12.5% FBS+1% P/S
2）培養(yǎng)條件：Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%，Temperature: 37℃。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
4）Medium Renewal：every 2 to 3 days
5）Antigen Expression：CD2＋, CD7＋, CD11a＋, CD28＋, CD45＋, CD54＋, CD56＋, CD1 -,
6）Applications：transfection and can be used effectively for immunological ex vivo purging
一． NK-92（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）培養(yǎng)注意事項：
1. NK-92和NK-92MI細胞均為懸浮生長，大部分細胞聚集成團，少數(shù)分散的細胞，并且細胞間隙會有較多的死細胞和細胞碎片；
2. NK-92和NK-92MI細胞對營養(yǎng)需求很高，建議使用進口胎牛血清和馬血清培養(yǎng)，白介2的質(zhì)量對NK-92的生長影響很大，正常培養(yǎng)時換液周期為2天，建議使用半量換液和離心換液交替進行，即半量換液1-2次后離心全量換液一次，盡量減少離心次數(shù)；
3. 細胞生長時聚集的細胞團會逐漸增大，正常的細胞團顯微鏡下為白色透亮的，若細胞聚集太多，出現(xiàn)細胞團中部發(fā)暗時可在換液后將細胞團輕輕搖散，或者用移液器輕輕吹散，吹打力度不可過大，否則會出現(xiàn)大量死細胞和細胞碎片。這個細胞沒有聚團的活性很低。細胞對營養(yǎng)要求也很高，千萬不能團塊太大營養(yǎng)不足，不然48小時細胞就會死亡。這個細胞計數(shù)是不準確的 因為細胞成團長，團塊不可能吹散計數(shù)，還有就是散落的細胞細胞活性不好，所以細胞檢測活性也是不準確的。
4. 運輸條件可能會對細胞造成一定的影響，收到細胞后請按以下方法處理：
a) 收到細胞后靜置，顯微鏡下觀察細胞并拍照，主要找聚集的細胞團；
b) 將培養(yǎng)瓶豎置，靜置4~6h，肉眼觀察大部分細胞團都沉到底部后，將多余的培養(yǎng)基輕輕倒入50ml離心管中離心收集一部分細胞，底部留3~4ml（剩余20ml左右時可換用移液器吸取上清，保證大部分細胞團留在瓶中），補加3~4ml新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，若細胞量較多可分兩瓶，離心收集的細胞也可單獨接種培養(yǎng)；
c) 細胞對機械損傷特別敏感，所以最好是不要離心
5. 細胞復蘇時不能離心處理，提前準備一個離心管，加10ml培養(yǎng)基，把溶解后的凍存細胞接入，靜置2小時左右，細胞都沉降在底部，去上清，用完全培養(yǎng)基接到T25培養(yǎng)瓶內(nèi)進行培養(yǎng)
二．細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物（mingzhoubio）按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
培養(yǎng)細胞請注意
(1)傳代時細胞的接種密度應控制在 1萬-4萬 活細胞/平方厘米。
(2)選用高質(zhì)量的胎牛血清配制培養(yǎng)液。
