細(xì)胞名稱 c666-1;人鼻咽癌細(xì)胞
生長特性 貼壁
培養(yǎng)條件 RPMI-1640+10%FBS+1%P/S
培養(yǎng)環(huán)境 37℃ 5% CO2,,95% AIR
傳代比例 1:2傳代,2~3天換液
凍存條件 90%FBS+10%DMSO
QC檢測 支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
1、人鼻咽癌細(xì)胞傳代:
1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀細(xì)胞用1-2ml完全培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
2、人鼻咽癌細(xì)胞凍存:
1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;
4)先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
3、人鼻咽癌細(xì)胞復(fù)蘇:
1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細(xì)胞移至含6ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀用6ml完全培養(yǎng)基重懸,接種25cm2培養(yǎng)瓶,于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);