細(xì)胞特性
1） 來源：小鼠肺
2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3） 含量：>1x106 個(gè)/mL
4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5） 規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝
運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運(yùn)輸，收到后
立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80 度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生
長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3 天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。
細(xì)胞用途：僅供科研使用。
細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2）請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，酒精消毒瓶壁并將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)
約 2-3h。
3）T25 瓶中的培養(yǎng)基取出離心后，去上清，添加 6ml 新的完全培養(yǎng)基，重新加
入原 T25 培養(yǎng)瓶。
4）如果細(xì)胞長(zhǎng)滿 90%請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用本公司附帶的完全培養(yǎng)
基。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備 D/f12 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，2-5%；胰島素 0.005mg/ml, 雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，離
心管加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 800-1000RPM 條件下離心 4-5 分鐘，棄去
上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入 T25 培養(yǎng)瓶中
培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至 6ml。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 將上清取出，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培
養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部
分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量完全培養(yǎng)基
終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，和上清一起在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清
液，加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：
2 到 1:4 比例分到新的含 6ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1，細(xì)胞凍存時(shí)，取出上清，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓脫落
后，加入 1ml 完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加
入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度 1-2xE6/ml，每支凍存
管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，至少 2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液
氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項(xiàng)：
1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立
即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注
意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
