一、細(xì)胞培養(yǎng)條件

細(xì)胞英文名稱 ATDC5

細(xì)胞中文名稱 小鼠胚胎瘤細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁

培養(yǎng)體系：DMEM+10%FBS

傳代方法：建議第一次 1:2 傳代

傳代情況：2 天換液

凍存條件：細(xì)胞庫(kù)無(wú)血清凍存液

備注：收集瓶中培養(yǎng)基，留作過(guò)渡培養(yǎng)

二、細(xì)胞收到后處理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。收到

細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開(kāi)外包裝，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)

格無(wú)菌操作，培養(yǎng)箱靜置 2-4 小時(shí)。鏡下觀察：未超過(guò) 80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入 6ml 完全培養(yǎng)基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)；超過(guò) 80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 5mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6cm 皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1-2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化

1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，

輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加 5ml 以上含 10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在 1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按 5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 5-6 ml 培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到 2ml 小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用 75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶或 6cm 培養(yǎng)皿，加入 5ml 左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò) 80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò) 80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。

售后服務(wù)告知書(shū)

一、收到細(xì)胞處理方法

1. 收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)

定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收

細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下

細(xì)胞狀態(tài)，100×，200×各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方

進(jìn)行售后的依據(jù)。

2. 收到細(xì)胞未開(kāi)封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)重發(fā)一次細(xì)胞。

3. 由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩氐挠绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞

后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后是需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和

發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后與客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于 7 天。

4. 如客戶對(duì)細(xì)胞的種類、純度、活性等特性有疑問(wèn)，需提供相應(yīng)的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果作

為依據(jù)。

二、細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)； 

2. 細(xì)胞污染問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 48 小時(shí)內(nèi)，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，核實(shí)后重發(fā)； 

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 24 小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后 24 小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞 未存活，（需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片），重發(fā)； 

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后 24 小時(shí)后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 4 小時(shí)候并且未開(kāi)封，出現(xiàn)污染，重發(fā)； 

5. 細(xì)胞活性問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 7 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定

細(xì)胞活力，核實(shí)后予重發(fā)； 

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第 2,3 天請(qǐng)拍照，3 天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7 天內(nèi)出現(xiàn)問(wèn)題有提供收到細(xì)胞前 3 天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的 50%收費(fèi)重發(fā)。