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人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株Mcf-7ADR

細(xì)胞名稱   Mcf-7/ADR;人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株

生長(zhǎng)特性   貼壁

培養(yǎng)條件   RPMI-1640+10%FBS+1%P/S+500ng/mlADR

培養(yǎng)環(huán)境   37℃   5% CO2,,95% AIR

傳代比例   1:2 傳代,2~3 天換液

凍存條件   90%FBS+10%DMSO

QC 檢測(cè)    支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性 

1、細(xì)胞傳代: 

1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí),棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細(xì)胞一次; 

2)添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng) 液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min; 

3)棄上清,沉淀細(xì)胞用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸,然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代,最后放入 37℃,5%CO2細(xì)胞 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 

2、細(xì)胞凍存: 

1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí),棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細(xì)胞一次; 

2)添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終 止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min; 

3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中; 

4)先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過(guò)夜,24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序 降溫盒可直接放入-80℃。  

3、細(xì)胞復(fù)蘇:

1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍,直至凍存管中無(wú)結(jié) 晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁; 2)將凍存管中的細(xì)胞移至含 6ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中, 1000rpm 離心 5min; 

3)棄上清,沉淀用 6ml 完全培養(yǎng)基重懸,接種 25cm2培養(yǎng)瓶,于 37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);