一、細胞培養(yǎng)條件
形態(tài)特性:圓形,單個或呈片
生長特性:懸浮 培養(yǎng)體系:1640+10%FBS
傳代方法:1:2-1:3
傳代情況:2~3 天換液/傳代
凍存條件:細胞庫無血清凍存液
備注:該
細胞源自一位 14 歲患有 T 淋巴細胞白血病男性的外周血。
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)淖詈棉k法。收到 細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),嚴 格無菌操作。鏡下觀察:未超過 80%匯合度時,可將瓶裝的完全培養(yǎng)液移入廢液缸中,懸浮
細胞需離心處理,加入 6ml 新鮮完全培養(yǎng)基,放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng);超過 80%匯合度 時,根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見
細胞培養(yǎng)步驟。
1)復蘇
細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入 5mL 培養(yǎng)基 混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將 所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入 6cm 皿中,加入約 6ml 培養(yǎng)基,培 養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹 勻,將細胞懸液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待
細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后 加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,進行離心收集,1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘,去除上 清,按凍存數(shù)量加入細胞庫推薦的無血清凍存液。
PS:若客戶收到 2ml 小管細胞,收到細胞后,用 75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或 安全柜內(nèi),嚴格無菌操作;將小管細胞轉移至 T25 培養(yǎng)瓶或 6cm 培養(yǎng)皿,加入 5ml 左右完 全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度:若密度未超過 80%,換液繼續(xù)培養(yǎng), 視情況傳代或者凍存。若密度超過 80%,可直接進行傳代(方法同上)。