細(xì)胞特性

1） 來源：肺癌

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，多角形；貼壁生長

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝

運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式： （1）干冰運(yùn)輸，收到后 立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80 度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生 長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。 收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3 天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

 

細(xì)胞接收后的處理： 1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì) 胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。 2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4 或 5X 物鏡)下進(jìn)行，能 準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?10X 和 20×物鏡下，同時(shí)給剛收 到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各 2-3 張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì) 胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。 3）觀察好細(xì)胞狀態(tài)后， 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。 4） 貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落 或者脫落后抱團(tuán)生長，可將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h，然后抽出瓶中 的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞 1000rpm 離心 5 分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照 說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。 5） 懸浮細(xì)胞：T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和 細(xì)胞 1000rpm 離心 5 分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說 明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。 6）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說 明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建 議 1：2 傳代 。

 

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

 

本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備： 1）準(zhǔn)備 F-12K 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度 為 70%-80%。 3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二．細(xì)胞處理： 1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入 37℃水浴中（水面要低 于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有 4mL 培養(yǎng)基的 15ml 離心 管中混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，加入 1mL 培 養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有 5ml 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。 第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法： 1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。 2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部 分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入 3ml 此細(xì)胞的 培養(yǎng)基終止消化。 3. 輕輕吹打后吸出，移入 15ml 離心管中，在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘， 棄去上清液，加入 1mL 培養(yǎng)液后吹勻。 4. 收到細(xì)胞后首次傳代推薦將細(xì)胞懸液按 1： 2 的比例分到新的含 6ml 培養(yǎng) 基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按 1:2 到 1:5 的比例進(jìn)行。 3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

 

下面 T25 瓶為類；

1，細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2，4min1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入 血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于 1x10E6/ml， 每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，至少 2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入 液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染， 請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作， 并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。