細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：巨噬細(xì)胞

2） 形態(tài)：多角形，貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106 個(gè)/T25 方瓶

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝 

 

細(xì)胞接受后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。

2） 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)約 2-3h。

3） 棄去 T25 瓶中的培養(yǎng)基，換用新鮮的完全培養(yǎng)基。

4） 如果細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。

5） 接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。 細(xì)胞用途：僅供科研使用。 

                        

明舟生物的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備 DMEM/F12 培養(yǎng)基，89%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；P/S，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二、細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入 37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解 凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有 4mL 培養(yǎng)基的 15ml 離心管中混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，加入 1mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有 5ml 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中 培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法： 1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2次。 2. 加 2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消 化 5-8分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅

 

速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入 5ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。 3. 輕輕吹打后吸出，移入 15ml離心管中，在 1200RPM條件下離心 5分鐘，棄去上清液，加入 10mL培養(yǎng)液后吹勻。 4. 每 5ml細(xì)胞懸液分裝到 2個(gè) T-25培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。 3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，先要消化處理并進(jìn)行細(xì) 胞計(jì)數(shù)。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的 1-3步驟進(jìn)行，最后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計(jì) 數(shù)后離心，用血清重懸浮，加 DMSO至最終濃度為 10%。加入 DMSO后迅速混勻，按每 1ml的 數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于 1X106個(gè)細(xì)胞凍存。 

 

注意事項(xiàng)：  1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。 2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢 液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。