產(chǎn)品名稱 |
RWPE-1 |
商品貨號 |
MZ-0323 |
中文名稱 |
人前列腺上皮細胞 |
規(guī)格 |
T25 |
組織來源 |
前列腺上皮;HPV18轉(zhuǎn)化;男性 |
形態(tài)特征 |
上皮細胞 |
生長特性 |
貼壁生長 |
細胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
特征特性 |
腫瘤抑制基因: p53 + [PubMed: 9214605] pRB + [PubMed: 9214605] 一位正常男性前列腺組織切片的周圍區(qū)域的上皮細胞用單拷貝的人乳頭瘤病毒的18(HPV-18)進行轉(zhuǎn)化,建立了RWPE-1 (ATCC CRL-11609) 細胞株 [PubMed: 9214605]. 在三維Matrigel培養(yǎng)時,在雄激素作用下,RWPE-1細胞形成腺胞并向培養(yǎng)基中分泌PSA。[PubMed: 11170142]. 當與Matrigel或基質(zhì)細胞混合注射雄性裸鼠時,RWPE-1細胞也能形成腺胞[PubMed: 11304724] 并產(chǎn)生PSA。 來源于RWPE-1的細胞再用Kirstin鼠類腫瘤病毒轉(zhuǎn)染Ki-ras基因,建立了能成瘤的RWPE-2細胞株(ATCC CRL-11610) [PubMed: 9214605] 和 RWPE2-W99 (ATCC CRL-2853) 細胞株。 另外,用N-甲醇-N-硝基脲(MNU)處理RWPE-1,建立了一系列模擬前列腺癌進程中不同時期的成瘤細胞株。 它們是 WPE1-NA22 (ATCC CRL-2849), WPE1-NB14 (ATCC CRL-2850, WPE1-NB11 (ATCC CRL-2851) 和 WPE1-NB26 (ATCC CRL-2852) 細胞株。 據(jù)提供者報道,RWPE-1 細胞株(ATCC CRL-11609)經(jīng)過檢測,乙肝、丙肝、人免疫缺陷病毒都呈陰性。 |
培養(yǎng)條件 |
基本培養(yǎng)基作為Invitrogen (GIBCO)提供的kit的部分: 角化細胞無血清培養(yǎng)基K-SFM,kit目錄號17005-042。隨kit提供這株細胞生長所需的兩種添加劑(牛垂體提取物BPE及人重組表皮生長因子EGF)。 配制完全生長培養(yǎng)基,需添加以下成分: 0.05 mg/ml BPE – 隨K-SFM提供 5 ng/ml EGF -隨K-SFM提供。 注意: 不要過濾完全培養(yǎng)基。 氣相: 空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度: 37.0°C。或者KM專用培養(yǎng)基 |
傳代方法 |
1:3傳代,2-3天傳一代。 |
凍存條件 |
無血清細胞凍存液 |
細胞傳代步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
細胞復蘇步驟 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。 |
細胞凍存步驟 |
待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |