| 備注 |
培養(yǎng)基配方：Y187菌株是Clontech公司開發(fā)的GAL4系統(tǒng)酵母單雜，雙雜實(shí)驗(yàn)用菌株，MATα型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)?；蚺cMATa型酵母菌株（Y2HGold，AH109等）通過mating操作進(jìn)行篩庫試驗(yàn)。，Transformationmarker為:trp1,leu2，報告基因?yàn)椋簂acZ,MEL1。Y187--‐GAL4酵母雙雜系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。質(zhì)粒PGBKT7的篩選標(biāo)志為TRP1，用于表達(dá)DNA--‐BD(來自酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4N端1~174位氨基酸)與目標(biāo)蛋白(Bait)的融合蛋白；質(zhì)粒PGADT7的篩選標(biāo)志為LEU，用于表達(dá)AD(GAL4C端768~881位氨基酸)與目標(biāo)蛋白（Prey）的融合蛋白。GAL4系統(tǒng)原理：一個完整的酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4可分為功能上相互獨(dú)立的兩個結(jié)構(gòu)域：位于N端1~174位氨基酸區(qū)段的DNA結(jié)合域（DNA--‐BD）和位于C端768~881位氨基酸區(qū)段的轉(zhuǎn)錄激活域(AD)。DNA--‐BD能夠識別GAL4--‐responsivegene的上游激活序列UAS，并與之結(jié)合。而AD可以啟動UAS下游的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。BD和AD單獨(dú)存在不能激活轉(zhuǎn)錄，但當(dāng)二者接近時，則呈現(xiàn)完整的GAL4活性，使含有UAS的啟動子下游基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)。正常條件下，BD不與AD結(jié)合，將要檢測的蛋白質(zhì)分別與BD和AD融合，形成bait融合蛋白（bait--‐BD）和prey融合蛋白（prey--‐AD），如果bait和prey發(fā)生相互作用，就會促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，從而激活報告基因的轉(zhuǎn)錄。Y187有兩個報告基因：lacZ,MEL1，分別由兩種不同的啟動子（G1，M1）啟動，這兩種啟動子只有GAL4識別的17bp核心區(qū)相同，其余部分均不同，大大降低了酵母雙雜假陽性發(fā)生的概率.Y187菌株可用YPDA在28℃有氧的條件下培養(yǎng)，使用30%的甘油保藏菌種。；使用說明：nan；質(zhì)控示例：nan |
