產(chǎn)品名稱 |
人睪丸支持細(xì)胞 |
商品貨號 |
MZ-3576 |
組織來源 |
人人睪丸組織,提取純化之后立即凍存 |
規(guī)格 |
5×105cells/T25培養(yǎng)瓶 |
生長特性 |
貼壁 |
細(xì)胞形態(tài) |
成纖維細(xì)胞樣 |
培養(yǎng)基 |
DMEM-F12培養(yǎng)基,含F(xiàn)BS、Glutamine、Penicillin、Streptomycin等 |
細(xì)胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
細(xì)胞描述 |
睪丸支持細(xì)胞對生殖細(xì)胞的影響至關(guān)重要,睪丸支持細(xì)胞一旦病變會(huì)導(dǎo)致精子發(fā)生和形成障礙[1、2]。除了形成blood-testis障礙外,睪丸支持細(xì)胞還提供主要的結(jié)構(gòu)對細(xì)精管的支持和保護(hù)的生殖細(xì)胞免疫系統(tǒng)[1]。異常擴(kuò)散可導(dǎo)致男性生殖障礙,例如睪丸生殖細(xì)胞癌癥、隱睪、尿道下裂、低精子計(jì)數(shù)[2]。該細(xì)胞擴(kuò)散控制的部分是促卵泡激素(FSH)和甲狀腺激素(TH),FSH驅(qū)動(dòng)器增殖和促進(jìn)一個(gè)更靜止?fàn)顟B(tài)[3]。培養(yǎng)人的睪丸支持細(xì)胞能更好地了解睪丸發(fā)育不全綜合癥和開發(fā)治療男性生殖障礙。 |
細(xì)胞傳代步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
細(xì)胞復(fù)蘇步驟 |
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
細(xì)胞凍存步驟 |
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |