1.無氧水的配制

煮沸除氧：將100mL水在燒杯中加熱煮沸約15分鐘，利用持續(xù)加熱沸騰除去部分氧氣，將煮沸后的50mL水趁熱倒入至預置換氮氣后的120mL厭氧瓶中，蓋緊橡膠塞，換氣除氧：抽真空，換氮氣，反復3次；如果沒有真空裝置，可趁熱通氮氣15分鐘，蓋緊橡膠塞，加鋁蓋；或滅菌后趁熱再通氮氣15分鐘；這一步驟是為了進一步除氧，利用氮氣置換出殘留的氧氣；滅菌備用：將配制好的無氧水進行常規(guī)濕熱滅菌20分鐘。

2. 無氧溶液的配制原則

假如該化學品耐高溫，可先將化學品稱于厭氧瓶中，然后按無氧水的配制方法配制無氧溶液。

假如該化學品不耐高溫（或耐高溫），可將該化學品稱量后轉(zhuǎn)移入?yún)捬跏痔紫渲?，放置過夜，將該化學品溶解于事先配制好的無氧水中，再過濾除菌。

3.厭氧微生物生長所需的維生素和微量元素

以上介紹的無氧水和無氧溶液配制方法適用于維生素和微量元素溶液的配制。以安全和不破壞化學物質(zhì)為原則，根據(jù)化學性質(zhì)選擇最佳配制方法。

Widdel 和 Bak論文提供了厭氧微生物所需的維生素和微量元素（簡稱Widdel溶液）的配方。下列圖片為該文獻的掃描件，請引用該文獻。

Nonchelated trace element mixture contains: HCl 100 mM, FeSO4 7.5 mM, H3BO3 0.5 mM, MnCl2 0.5 mM, CoCl2 0.8 mM, NiCl2 0.1 mM, CuCl2 0.01 mM, ZnSO4 0.5 mM, Na2MoO4 0.15 mM.

Selenite-Tungstate solution contains: NaOH 10 mM, Na2SeO3 0.02 mM, Na2WO4 0.02 mM.

Vitamin mixture contains: Sodium phosphate buffer (pH 7.1, 10 mM) 100 mL, 4-Aminobenzoic acid 4 mg, D(+)-Biotin 1 mg, Nicotinic acid 10 mg, Calcium D(+)-pantothenate 5 mg, Pyridoxine dihydrochloride 15 mg.

Thiamine solution contains: sodium phosphate buffer(pH 3.4, 25 mM) 100 mL, thiamine chloride 10 mg.

Vitamin B12 solution contains: H2O 100 mL, cyanocobalamine 5 mg.

 4. 厭氧微生物培養(yǎng)基的配制

先配制厭氧基礎培養(yǎng)基，含有0.58 mM K2HPO4, 0.42 mM KH2PO4, 0.1 mM NH4Cl；

將上述混合液滅菌并冷卻至室溫；

 分別配制單獨的厭氧母液NaHCO3和CaCl2，滅菌并冷卻至室溫；加入到厭氧基礎培養(yǎng)基中，至終濃度10 mM NaHCO3, 0.25 mM CaCl2；

下列5種Widdle溶液按終體積百分比加入?yún)捬趸A培養(yǎng)基中：0.1%(v/v) Nonchelated trace element mixture, 0.05%(v/v) Selenite-Tunstate solution, 0.1%(v/v) Vitamin mixture, 0.1%(v/v) Thiamine solution, 0.1%(v/v) Vitamin B12 solution；

配制所研究的厭氧菌所需的碳源、電子供體、電子受體、還原劑、和酵母粉等的厭氧母液。

分別加入不同的電子供體、電子受體、碳源等配制成適用于不同生理條件的厭氧微生物生長：以乳酸、硝酸鹽、硫酸鹽為例

硝酸鹽還原菌培養(yǎng)基：20 mM Sodium lactate為碳源和電子供體, 20 mM NaNO3為電子受體；

發(fā)酵性細菌培養(yǎng)基：20 mM Sodium lactate為碳源，2.5mM Cysteine hydrochloride為還原劑，0.5g/L Yeast Extract；

硫酸鹽還原菌培養(yǎng)基：20 mM Sodium lactate為碳源，20 mM Na2SO4為電子受體, 2.5mM Cysteine hydrochloride為還原劑，0.5g/L Yeast Extract

注意要點 

以上實驗均應該在嚴格厭氧操作條件下完成 。

基礎培養(yǎng)基、碳源、電子受體供體等均可根據(jù)不同的環(huán)境條件和生理菌群加以改變。

上述基礎培養(yǎng)基配方組分僅供參考，可能不適用于你所研究的特定微生物種。