(1) 取潔凈的血球計數(shù)板一塊,在計數(shù)室上蓋上一塊蓋玻片。
(2) 將酵母菌液搖勻,用滴管吸取少許,從計數(shù)板中間平臺兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴(不宜過多),使菌液沿兩玻片間自行滲入計數(shù)室,勿使產(chǎn)生氣泡,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌液。也可以將菌液直接滴加在計數(shù)室上,然后加蓋蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡)。
(3) 靜置約5分鐘,先在低倍鏡下找到計數(shù)室后,再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察計數(shù)。
(4) 計數(shù)時用16中格的計數(shù)板,要按對角線方位,取左上、左下、右上、右下的4個中格(即100小格)的酵母菌數(shù)。如果是25中格計數(shù)板。除數(shù)上述四格外,還需數(shù)中央1中格的酵母菌數(shù)(即80小格)。由于菌體在計數(shù)室中處于不同的空間位置,要在不同的焦距下才能看到,因而觀察時必須不斷調(diào)節(jié)微調(diào)螺旋,方能數(shù)到全部菌體,防止遺漏。如菌體位于中格的雙線上,計數(shù)時則數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線,以減少誤差。
(5) 凡酵母菌的芽體達到母細胞大小一半時,即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復(fù)分數(shù)2-3次(每次數(shù)值不應(yīng)招差過大,否則應(yīng)重新操作),取其平均值,按下述公式計算出每毫升菌液所含酵母菌細胞數(shù)。 每毫升菌液含菌數(shù)=每小格酵母細胞數(shù)×4000×1000×稀釋倍數(shù) 。
(6) 血球計數(shù)板用后,在水龍頭上用水柱沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或吹風(fēng)機吹干