一、技術(shù)原理與實驗步驟
將目的基因片段連接至合適的原核表達(dá)載體后，轉(zhuǎn)化到菌株內(nèi)，隨后利用菌自身的蛋白表達(dá)系統(tǒng)通過溫度和誘導(dǎo)劑的控制，誘導(dǎo)其在宿主菌內(nèi)表達(dá)目的蛋白質(zhì)，將表達(dá)樣品進(jìn)行SDS-PAGE 以檢測表達(dá)蛋白質(zhì)。原核表達(dá)系統(tǒng)是至今為止最為成熟可靠的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，其優(yōu)點是實驗周期短、成本低、產(chǎn)量高。
二、服務(wù)流程
1.依據(jù)客戶提供的蛋白基因、載體要求，設(shè)計克隆方案，構(gòu)建原核表達(dá)載體。可提供6xHis、GST、MBP等攜帶標(biāo)簽及腸激酶、凝血酶等蛋白酶切除標(biāo)簽蛋白的表達(dá)載體，提供多種選擇；
2.將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到菌株內(nèi)，優(yōu)化溫度、IPTG濃度等條件誘導(dǎo)蛋白表達(dá)，SDS-PAGE驗證；
3.對蛋白性質(zhì)進(jìn)行分析，選擇合適的方法分離純化蛋白；
4.依據(jù)客戶要求如蛋白純度、是否需要帶標(biāo)簽、帶何種類型的標(biāo)簽、蛋白溶解緩沖液要求，是否凍干等提供最終蛋白產(chǎn)品，附加載體構(gòu)建報告、SDS-PAGE檢測報告、目的基因質(zhì)粒、重組細(xì)菌菌株、重組表達(dá)菌株等信息。
三、大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)
大腸桿菌蛋白表達(dá)系統(tǒng)是目前應(yīng)用最廣泛，也是最經(jīng)濟(jì)實惠的蛋白表達(dá)系統(tǒng)。E. coli具有遺傳背景清楚、細(xì)胞增殖快、表達(dá)量高、穩(wěn)定性好和抗污染能力強等特點，適用于多種屬蛋白的表達(dá)，尤其對小分子蛋白的生產(chǎn)具有極大的優(yōu)勢，但也存在一些問題，如易形成包涵體和含有內(nèi)毒素等。泰斯拓生物提供從密碼子優(yōu)化到重組蛋白表達(dá)/純化的一站式服務(wù)以及內(nèi)毒素去除等附加服務(wù)，以滿足不同的定制需求。我們擁有豐富的E. coli 可溶性蛋白表達(dá)/純化及蛋白復(fù)性經(jīng)驗，擁有多種E. coli細(xì)胞株和表達(dá)載體，可為客戶提供優(yōu)質(zhì)的原核蛋白表達(dá)服務(wù)。
