醫(yī)學上通常用裸鼠成瘤實驗來研究腫瘤及其治療：用帶有人源移植瘤的裸鼠來試可能的靶向藥物，可以在腫瘤復發(fā)之前都找到真正有效的靶向藥物。裸鼠成瘤實驗，即在裸鼠皮下注入腫瘤細胞，觀察腫瘤的形成、發(fā)展及抗腫瘤藥物的效果。
今天以Hep-G2細胞為例，介紹裸鼠皮下成瘤的實驗小技巧及問題解答！
一、接種步驟
1、 接種是選好進針部位，大部分選擇腋下接種，接種前用75%的酒精對進針部位擦拭消毒。
2、 排去一次性針頭內(nèi)空氣，從進針部位向前穿刺大約1cm，進行皮下注射。
3、 注射時，每次注射量大約為0.2ml，每日觀察。
4、 注射完畢后，緩慢退出針頭，盡量避免漏液；
5、 注射過程中，細胞需一直置于冰上，使細胞處于比較低的代謝狀態(tài)，并盡量在半小時內(nèi)完成。
實驗結(jié)果：一般接種7-10天后便可看到腫塊長起；
二、操作小技巧
1、細胞的狀態(tài)是成瘤實驗的關鍵，所以細胞生長狀態(tài)一定要好，取處于對數(shù)生長期的細胞，細胞達80-90%左右密度為宜。收集細胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基；
2、注射向前方穿行，注射前針頭稍微動一動，能動說明在皮下，否則可能在皮內(nèi)或者肌肉內(nèi)；
3、注射前，要排去針管內(nèi)的空氣；
4、針頭在皮下走一段再注射，速度不可太快
5、接種點離進針點盡量1cm遠，減少漏液和污染的可能；
三、常見問題及解答
一、這個實驗為什么用裸鼠而不用普通的老鼠或者小白鼠？
裸鼠成瘤實驗用的裸鼠，最大的特點是沒有胸腺等免疫器官，它的免疫力幾乎為０，對腫瘤細胞沒有免疫作用，易于成瘤。
自然狀態(tài)下的老鼠和小白鼠有完整的免疫系統(tǒng)。免疫系統(tǒng)有免疫防御、免疫自穩(wěn)、免疫監(jiān)視三大生理功能，并通過免疫識別和免疫排斥攻擊兩大生理反應起作用。具有完整免疫系統(tǒng)的老鼠和小白鼠，會通過免疫識別反應來識別自己與非己，發(fā)現(xiàn)注入的腫瘤細胞這種非己抗原后，會啟動免疫排斥攻擊反應進行殺滅，這樣腫瘤就很難形成，實驗就難以進行下去。
二、小鼠瘤子長起來又消失？
腫瘤塊先縮小，后變大很常見，很可能是炎癥反應，腫瘤細胞被小鼠自身吸收，繼續(xù)觀察腫瘤細胞吸收之后是否經(jīng)過幾周還能長出來，長不起來建議換鼠。
三、如何抓牢裸鼠?
可以用左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴，然后進行接種。
四、是否可以在一只小鼠進行多個點荷瘤？
不可以，一只老鼠就只能接種一個點。因為一個老鼠身上有多個腫瘤塊的情況下，可能會相互影響。
五、腫瘤長不出來是怎么回事？
第一：腫瘤生長周期很慢，一周開始生長腫塊，大約需要1~2個月才能長成腫瘤。
第二：可能是細胞狀態(tài)差，活力不好，或是腫瘤細胞不易成瘤，需加入Matrigel輔助或增大接種量或更換細胞系；
第三：一方面可能是小鼠周齡太大，或小鼠免疫排斥，建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠（Nod-scid小鼠，NOG小鼠＞Nude裸鼠）
六、腫瘤體積相差很大，大小不一？
首先，不是所有的腫瘤都能夠長得均一形態(tài)規(guī)則。
其次，荷瘤分組發(fā)現(xiàn)小鼠腫瘤體積差距很大，這可能跟小鼠周齡及接種細胞量不一致導致，建議重新做實驗分組。
最后，一般構(gòu)建腫瘤模型，裸鼠主要保證周齡，周齡小一點好。
總之，裸鼠成瘤概括來說就是，大膽的接種，勤觀察，勤記錄，一定要仔細記錄！
