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人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT116)

人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT 116)紹:

人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT 116)1979 M.Brattain 等從患結(jié)腸癌的男性病人中分離的三株惡性細(xì)胞之一。在半固體瓊脂糖培養(yǎng)基中形成克隆。人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT 116)在無胸腺的裸鼠有致瘤性,形成上皮樣的腫瘤。

人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT 116)特性:

1) 來源:結(jié)直腸癌

2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣

3) 含量:>1x106 /mL

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運(yùn)輸和保存:可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:

1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;

2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

細(xì)胞用途:僅供科研使用。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一.人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT 116)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1)準(zhǔn)備McCoy’s 5A 培養(yǎng)基(McCoy’s 5A,GIBCO,貨號16600-082);北美胎牛血清,10%;雙抗1%。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37 攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二.細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ)1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)?span lang="EN-US">細(xì)胞懸液加入10cm 皿中,加入約8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細(xì)胞1-2 次。

2. 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM 條件下離心4 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 細(xì)胞懸液按12 15 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25 瓶為例;

1細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗瓶底1-2 次后加入1ml 胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml 完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

21000RPM 離心5 分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO 至最終濃度為10%。加入DMSO 后迅速混勻,按每1ml 的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106 個細(xì)胞凍存。

3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,至少2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項:

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。