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斑馬魚(yú)胚胎成纖維細(xì)胞(pac2)

斑馬魚(yú)胚胎成纖維細(xì)胞pac2特性:

1 來(lái)源:斑馬魚(yú)

2 形態(tài):貼壁,成纖維

3 含量:>1x106 個(gè)/mL

4 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;

2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

3)收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

斑馬魚(yú)胚胎成纖維細(xì)胞pac2用途:僅供科研使用。

細(xì)胞接收后的處理:

1 收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí),最好在低倍鏡(45X物鏡)下進(jìn)行,能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度??醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?/span>10X20×物鏡下,同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4 貼壁細(xì)胞:在運(yùn)輸過(guò)程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng),可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。

5 懸浮細(xì)胞T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。

6備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議12傳代 。

斑馬魚(yú)胚胎成纖維細(xì)胞pac2培養(yǎng)步驟

一.斑馬魚(yú)胚胎成纖維細(xì)胞pac2培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1 準(zhǔn)備L15培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,100%;二氧化碳,0% 溫度:28℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

細(xì)胞基本信息:https://web.expasy.org/cellosaurus/CVCL_5853

二. 細(xì)胞處理:

1 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml

2 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

注:第一次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

3細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25瓶為類;

1,細(xì)胞凍存時(shí),取上清,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細(xì)胞密度1-2xE6/ml,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,-80過(guò)夜(至少4個(gè)小時(shí))以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。