国产黄片大全在线播放_多毛中国农村熟女吟呻对白_欧洲乱码在线播放_亚洲五月婷婷久久综合色

熱門搜索:A549    293T 金黃色葡萄球菌 大腸桿菌 AKK菌
購物車 1 種商品 - 共0元
當(dāng)前位置: 首頁 > 行業(yè)資訊 > 人胰腺癌細(xì)胞(PANC10.05)

人胰腺癌細(xì)胞(PANC10.05)

人胰腺癌細(xì)胞PANC10.05特性

1 來源:胰腺

2 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長

3 含量:>1x106 /mL

4 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;

2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

3)收到細(xì)胞后請拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。

人胰腺癌細(xì)胞PANC10.05用途:僅供科研使用。

細(xì)胞接收后的處理:

1 收到細(xì)胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時,最好在低倍鏡(45X物鏡)下進(jìn)行,能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度??醇?xì)胞的形態(tài)請在10X20×物鏡下,同時給剛收到的細(xì)胞拍照,(10×20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4 貼壁細(xì)胞:在運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞會有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長,可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。

5 懸浮細(xì)胞T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。

6備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞  收到細(xì)胞后第一次傳代建議12傳代 。      

人胰腺癌細(xì)胞PANC10.05培養(yǎng)步驟

一.人胰腺癌細(xì)胞PANC10.05培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,15%;添加0.01ug/ml胰島素;雙抗,1%。

2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5% 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二.細(xì)胞處理:

1 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2 細(xì)胞代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 細(xì)胞懸液按1215的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注:第一次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

3細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25瓶為類;

1,細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。

3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。