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人胰腺癌細胞(PATU 8988S)

人胰腺癌細胞PATU 8988S特性

1 來源:胰腺

2 形態(tài):上皮細胞樣,貼壁生長

3)含量:>1x106 /mL

4)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式:

1)干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;

2)存活細胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

3)收到細胞后請拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。

人胰腺癌細胞PATU 8988S用途:僅供科研使用。

細胞接收后的處理:

1 收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。

2 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml新的完全培養(yǎng)基。

4 如果細胞長滿(90%以上)請及時進行細胞傳代。

5 接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

人胰腺癌細胞PATU 8988S培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%

2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5% 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二.細胞處理:

1 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 細胞懸液按1215的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注:第一次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

3細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。

 下面T25瓶為類;

1,細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度不低于1x10E6/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。

3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。