中國倉鼠卵巢細(xì)胞(懸浮細(xì)胞)(CHO-K1)描述:中國倉鼠卵巢細(xì)胞(懸浮細(xì)胞)(CHO-K1)是源自成年中國倉鼠卵巢深入活體組織切片的CHO細(xì)胞的亞克隆。在本庫通過支原體檢測(cè)。
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(懸浮細(xì)胞)(CHO-K1)特性
動(dòng)物種別:中國倉鼠
性別:雌
組織來源:卵巢
形態(tài):上皮細(xì)胞
細(xì)胞馴化前的培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件:
供應(yīng)限制:僅供研究之用。
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(懸浮細(xì)胞)(CHO-K1)馴化:
復(fù)蘇CHO-K1細(xì)胞轉(zhuǎn)入T25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶,以F12K基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加10%血清培養(yǎng),待細(xì)胞長滿單層后,加入 0.25 % 胰蛋白酶消化,傳代至裝有完全培養(yǎng)基的T25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶(Corning)中繼續(xù)培養(yǎng),當(dāng)細(xì)胞鋪滿瓶底時(shí),即得貼壁 CHO-K1 細(xì)胞。取貼壁CHO-K1 細(xì)胞,換液,加入15 mL含血清的完全基和 15 mL無血清CHO-K1專用培養(yǎng)基,2天后吸出一半培養(yǎng)液,加入等量的無血清CHO-K1,每2天重復(fù)一次此操作,直到胎牛血清濃度低于 1 %后,以基礎(chǔ)培養(yǎng)基B001 繼續(xù)培養(yǎng),即培養(yǎng)基中血清濃度依次以 5 %,2 .5 %,1.25%,0.625 %,0 %降低。細(xì)胞在無血清CHO-K1專用培養(yǎng)基中密度達(dá)到5 ×106cells/ mL時(shí),即得懸浮 CHO-K1 細(xì)胞。培養(yǎng)條件:37℃,5 % CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
運(yùn)輸和保存
可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式
(1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;
(2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
(3)收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。
細(xì)胞用途:僅供科研使用。
細(xì)胞接收后的處理:
1) 收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2) 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時(shí),最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度??醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?/span>10X和20×物鏡下,同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3) 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。
4) 貼壁細(xì)胞:在運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長,可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。
5) 懸浮細(xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。
6)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議1:2傳代 。
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(懸浮細(xì)胞)(CHO-K1)培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備:無血清CHO-K1專用培養(yǎng)基;谷氨酰胺,1%,雙抗,1%,細(xì)胞專用培養(yǎng)基:推薦CHO-K1-001。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90% CHO-K1專用培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
注:第一次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3) 細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
1,細(xì)胞凍存時(shí),取上清,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2,4min ,1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細(xì)胞密度1-2xE6/ml,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。