一、細(xì)胞培養(yǎng)條件
細(xì)胞英文名稱:CAM191
細(xì)胞中文名稱:EBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細(xì)胞
形態(tài)特性:淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性:懸浮
培養(yǎng)體系:1640+10%FBS
傳代方法:傳代情況
凍存條件:細(xì)胞庫(kù)無(wú)血清凍存液
二、細(xì)胞收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖?/font>
好辦法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,先打開(kāi)外包裝,用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶
消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作。鏡下觀察:未超過(guò) 80%匯合度時(shí),可將瓶
裝的完全培養(yǎng)液移入廢液缸中,懸浮細(xì)胞需離心處理,加入 6ml 新鮮完全培養(yǎng)基,
放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng);超過(guò) 80%匯合度時(shí),根據(jù)情況傳代或者凍存,具體
操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入
5mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL
培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入
6cm 皿中,加入約 6ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1、對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL
培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿
中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸
液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄
去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,進(jìn)行離心收集,1000RPM 條件下離
心 8-10 分鐘,去除上清,按凍存數(shù)量加入細(xì)胞庫(kù)推薦的無(wú)血清凍存液。
PS:若客戶收到 2ml 小管細(xì)胞,收到細(xì)胞后,用 75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放
到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作;將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶或 6cm 培
養(yǎng)皿,加入 5ml 左右完全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度:若
密度未超過(guò) 80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò) 80%,可直
接進(jìn)行傳代(方法同上)。