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小鼠中腦多巴胺能神經元細胞MN9D

 細胞特性

1 來源:多巴胺能神經元細胞

2 含量:>1x106

3 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

4 規(guī)格:T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝

運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后

立即轉入液氮或者-80 度冰箱凍存或直接復蘇;(2)存活細胞,收到后應繼續(xù)生

長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

收到細胞后請拍照,3 天內如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途:僅供科研使用。

細胞接收后的處理:

1 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細

胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,最好在低倍鏡(4 5X 物鏡)下進行,能

準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B(tài)請在 10X 20×物鏡下,同時給剛收

到的細胞拍照,(10×,20×)各 2-3 張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細

胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3

觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落

或者脫落后抱團生長,可將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h,然后抽出瓶中

的培養(yǎng)基和未貼壁細胞 1000rpm 離心 5 分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照

說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。

5 懸浮細胞:T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和

細胞 1000rpm 離心 5 分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說

明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。

6)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說

明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建

12 傳代 。

細胞培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1)準備 1640 培養(yǎng)基;優(yōu)質胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37 攝氏度,培養(yǎng)箱

濕度為 70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細胞處理:

1 復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加

4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補

1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將

細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2 細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培

養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部

分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止

消化。

3. 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4

鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 12 15 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者

瓶中。

第一次傳代推薦傳代比例為 1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決

定。

3細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。

下面 T25 瓶為例;

1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗瓶底 1-2 次后加入 1ml 胰酶,細

胞變圓脫落后,加入 2ml 完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

21000RPM 離心 5 分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加 DMSO 至最終濃度為

10%。加入 DMSO 后迅速混勻,按每 1ml 的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存

管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于 1X106 個細胞凍存。

3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,至少 2 個小時以后轉入液

氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項:

1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立

即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注

意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。