一、產(chǎn)品簡介
1. 產(chǎn)品名稱:小鼠真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞
2. 組織來源:皮膚組織
3. 產(chǎn)品規(guī)格:5×105 cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4. 細(xì)胞簡介:
小鼠真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自真皮組織;真皮,位于表皮深層,向下與皮
下組織相連,真皮結(jié)締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起,埋于基質(zhì)
內(nèi)。其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細(xì)胞和大量的膠原纖維彈性纖維,使皮膚既有彈
性,又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層。真皮的結(jié)構(gòu)組成是膠原蛋
白、彈性纖維以及基質(zhì)。微血管內(nèi)皮細(xì)胞(MEC)在炎癥反應(yīng)、腫瘤生長、創(chuàng)面
愈合過程中起著非常重要的作用。在創(chuàng)面愈合研究領(lǐng)域,由于表皮細(xì)胞、真皮成
纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)的成熟,人們對這兩種細(xì)胞早已進(jìn)行了大量深入的研究。
與之相比,對參與創(chuàng)面愈合過程的另一種主要細(xì)胞——真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞,則
因其體外分離培養(yǎng)技術(shù)的困難而使相關(guān)的研究受限。
本公司生產(chǎn)的小鼠真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法結(jié)
合密度梯度離心法、最后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量
約為5×105 cells/瓶;細(xì)胞經(jīng)CD31/vWF免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含
有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
5. 培養(yǎng)基信息:
M199、FBS、內(nèi)皮細(xì)胞生長添加劑、Heparin、Ascorbic Acid、Hydrocortisone、
Penicillin、Streptomycin等
我們推薦使用小鼠真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞專用完全培養(yǎng)基(產(chǎn)品貨號:CM-M201)作
為體外培養(yǎng)小鼠真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)基。
二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片
三、使用方法
在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,小鼠真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞可傳2-3代左右;建議您收到
細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗。
客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽
和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培
養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待
細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2-1:3適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補充新鮮的完全
培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
四、注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和技
術(shù)部溝通;由于運輸?shù)脑?,個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們
聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到
解決。
5. 該細(xì)胞只可用于科研。
備注:由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實驗室參考