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小鼠樹突狀瘤細(xì)胞 DC2.4

  DC2.4 小鼠樹突狀瘤細(xì)胞

細(xì)胞特性

1) 來源:骨髓;樹突狀細(xì)胞;C57BL/6

2) 形態(tài):貼壁生長(zhǎng)

3) 含量:>1x106 

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5) 規(guī)格:T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝 

 
運(yùn)輸和保存:可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:
(1)干冰運(yùn)輸,收到后 立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80 度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;
(2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生 長(zhǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。 收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照,3 天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。 
 
細(xì)胞用途:僅供科研使用。 
 
細(xì)胞接收后的處理:
1) 收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì) 胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。 
2) 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí),最好在低倍鏡(4 或 5X 物鏡)下進(jìn)行,能 準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度??醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?10X 和 20×物鏡下,同時(shí)給剛收 到的細(xì)胞拍照,(10×,20×)各 2-3 張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細(xì) 胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3) 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。
4) 貼壁細(xì)胞:在運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落 或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng),可將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h,然后抽出瓶中 的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞 1000rpm 離心 5 分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照 說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。
5) 懸浮細(xì)胞:T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和 細(xì)胞 1000rpm 離心 5 分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說 明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。                         
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備 1640+10%FBS
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37 攝氏度,培養(yǎng)箱 濕度為 70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢 查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部 分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止 消化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者 瓶中。 注:第一次傳代推薦傳代比例為 1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決 定。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。 下面 T25 瓶為例;       
1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗瓶底 1-2 次后加入 1ml 胰酶,細(xì) 胞變圓脫落后,加入 2ml 完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。       
2.1000RPM 離心 5 分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加 DMSO 至最終濃度為 10%。加入 DMSO 后迅速混勻,按每 1ml 的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存 管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于 1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,至少 2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液 氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 
 
 
注意事項(xiàng):  1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立 即與我們聯(lián)系。 2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注 意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。